GSH—ST測試盒（谷胱甘肽—S轉(zhuǎn)移酶測試盒） 型號(hào)：A004
1、 測定意義：此酶存在機(jī)體各種組織中，以肝臟為最多，其功能可消除體內(nèi)自由基和解毒雙重功能，此酶活力的大小，可反映機(jī)體氧化能力的高低，并對肝臟的早期損傷及肝癌的早期診斷具有一定價(jià)值。
2、 測試方法：化學(xué)比色法�？蓽y血清（漿）、組織、食物、藥物中的GST的含量。
3、 測試所需儀器：721、722或751、752可見光分光光度計(jì)，恒溫水浴箱，低速離心機(jī) 。
4、 規(guī)格：80T。
一、測定原理：
谷胱甘肽+1氯—2,4—二硝基苯GST 谷胱甘肽二硝基苯復(fù)合物+鹽酸 (GSH+C6H3（NO2）2Cl)GST C6H3（NO2）2GS+H++Cl- GST具有催化還原型谷胱甘肽（GSH）與1氯—2,4—二硝基苯（CDNB底物）結(jié)合的能力，在一定反應(yīng)時(shí)間內(nèi)，其活性低與高反應(yīng)前后底物濃度的變化呈線性關(guān)系。 本實(shí)驗(yàn)通過檢測GSH濃度的高低來反應(yīng)GST活力的大小，GSH（底物）濃度降低越多則GST活力越大。
二、測試所需儀器設(shè)備： 可見光分光光度計(jì)、恒溫水浴箱、離心機(jī)。
三、樣品前處理： 1、 50倍稀釋的溶血液的配制：取肝素抗凝全血20ml，以蒸餾水稀釋至1ml，混勻，放置5分鐘進(jìn)行測定。 配制好的溶血液要在1小時(shí)內(nèi)測定完，否則影響酶活力；抗凝全血若當(dāng)天來不及測定可放冰箱4℃保存，2~3天內(nèi)酶活力變化不大。 2、組織勻漿、線粒體、微粒體等的制備見實(shí)驗(yàn)方法學(xué)部分。 3、血清或血漿可以直接取樣。
四、血漿（清）的測定： 1、酶促反應(yīng)：
| |
測定管（酶管） |
對照管（非酶管） |
| 基質(zhì)液 (ml) |
0.3 |
0.3 |
| 血清（漿）（ml） |
0.1 |
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混勻，37℃水浴30分鐘
| 試劑二 （ml） |
2 |
2 |
| 血清（漿）（ml） |
|
0.1 |
混勻，3500~4000轉(zhuǎn)/分，離心10分鐘，取上清液作顯色反應(yīng)。
2、顯色反應(yīng)：
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空白管 |
標(biāo)準(zhǔn)管 |
對照管* （非酶管） |
測定管 （酶管） |
| 試劑二（ml） |
2 |
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| 20mmol/L GSH標(biāo)準(zhǔn)品（ml） |
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2 |
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| 上清液（ml） |
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2 |
2 |
| 試劑三（ml） |
2 |
2 |
2 |
2 |
| 試劑四（ml） |
0.5 |
0.5 |
0.5 |
0.5 | 混勻，室溫放置15分鐘，1cm光徑，蒸餾水調(diào)零，412nm處比色。
* 對照管可以只做2~3管，特別精細(xì)的實(shí)驗(yàn)則每管都需做對照管。
3、（1）定義：
規(guī)定每毫升血清（漿）在37℃反應(yīng)1分鐘，扣除非酶促反應(yīng), 使反應(yīng)體系中GSH濃度降低
1mmol/L為一個(gè)酶活力單位。
（2）公式： * 從操作表中可看出反應(yīng)液0.４ml(0.3ml基質(zhì)液+0.1ml樣本)加試劑二２ml共稀釋６倍。
六、組織勻漿的測定： 1、酶促反應(yīng)：
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測定管（酶管） |
對照管（非酶管） |
| 基質(zhì)液 (ml) |
0.3 |
0.3 |
| 待測組織勻漿 (ml) |
0.1 |
| 混勻，37℃水浴10分鐘（準(zhǔn)確計(jì)時(shí)）
| 試劑二 (ml) |
1 |
1 |
| 無水乙醇 (ml) |
1 |
1 |
| 待測組織勻漿 (ml) |
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0.1 | 混勻，3500~4000轉(zhuǎn)/分，離心10分鐘，取上清液作顯色反應(yīng)。
2、顯色反應(yīng)：
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空白管 |
標(biāo)準(zhǔn)管 |
對照管* （非酶管） |
測定管 （酶管） |
| 試劑二（ml） |
2 |
|
|
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| 20mmol/L GSH標(biāo)準(zhǔn)品（ml） |
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2 |
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| 上清液（ml） |
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|
2 |
2 |
| 試劑三（ml） |
2 |
2 |
2 |
2 |
| 試劑四（ml） |
0.5 |
0.5 |
0.5 |
0.5 | 混勻，室溫放置15分鐘，1cm光徑，蒸餾水調(diào)零，412nm處比色。
*對照管可以只做2~3管，特別精細(xì)的實(shí)驗(yàn)則每管都需做對照管。
3、（1）定義：規(guī)定每毫克組織蛋白，在37℃反應(yīng)1分鐘扣除非酶促反應(yīng)，使反應(yīng)體系中GSH濃度降低1mmol/L為一個(gè)酶活力單位。
七、50倍稀釋的溶血液的測定： 1、酶促反應(yīng)：
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測定管（酶管） |
對照管（非酶管） |
| 基質(zhì)液 (ml) |
0.2 |
0.2 |
| 樣品 (ml) |
0.2 |
| 混勻，37℃水浴30分鐘
混勻，3500~4000轉(zhuǎn)/分，離心10分鐘，取上清液作顯色反應(yīng)。
2、顯色反應(yīng)：
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空白管 |
標(biāo)準(zhǔn)管 |
對照管* （非酶管） |
測定管 （酶管） |
| GST2#（ml） |
2 |
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| 20umol/LGSH標(biāo)準(zhǔn)品（ml） |
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2 |
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| 上清液（ml） |
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|
2 |
2 |
| 試劑三（ml） |
2 |
2 |
2 |
2 |
| 試劑四（ml） |
0.5 |
0.5 |
0.5 |
0.5 | 混勻，室溫放置15分鐘，1cm光徑，蒸餾水調(diào)零，412nm處比色。
*對照管可以只做2~3管，特別精細(xì)的實(shí)驗(yàn)則每管都需做對照管。
3、 （1）定義：全血GST活力單位：規(guī)定每毫升全血在37℃反應(yīng)1分鐘，扣除非酶促反應(yīng)，使反應(yīng)體系中GSH濃度降低1mmol/L為一個(gè)酶活力單位 |